Metodele moderne de cercetare de laborator de înaltă tehnologie fac posibilă identificarea bolilor prin stadiu inițial. Bolile infecțioase se dezvoltă și evoluează, devin din ce în ce mai numeroase și sunt din ce în ce mai greu de identificat. Diagnosticarea folosind metoda PCR (reacție în lanț a polimerazei) este una dintre cele mai noi și mai precise. Pentru dezvoltarea sa, omul de știință Kary Mullis a fost distins cu Premiul Nobel.

Reacția polimerazei în lanț– o metodă de diagnostic genetic molecular care vă permite să găsiți la oameni diferite tipuri patologii infecțioase și ereditare, atât în ​​formă acută, cât și în formă cronică, și cu mult înainte ca patologia să înceapă să se manifeste. Majoritatea medicilor se confruntă cu această analiză în fiecare zi și nu își mai pot imagina cum fără ea este posibil să se facă diagnosticul corect și stadiul bolii.

Esența diagnosticului PCR

Analiza PCR folosește principiile biologie moleculară. Folosește enzime speciale care copiază în mod repetat fragmente de ARN și ADN, precum și microorganisme care provoacă boli și se găsesc în materialele biologice umane. Copierea are loc în mai multe etape, astfel încât se formează o reacție în lanț. După aceasta, specialiștii de laborator compară datele obținute cu o bază de date comună și identifică agenții cauzali ai bolii, precum și concentrația acestora. Diagnosticarea se realizează într-un dispozitiv special care răcește și încălzește o eprubetă cu biomaterial și se numește termociclator. Conformitate regim de temperatură afectează veridicitatea rezultatelor analizei.

Fragmentele de ADN ale microorganismelor pot fi conținute în următoarele materiale biologice:

• fluide biologice;
• sângele și derivații săi;
• răzuirea celulelor epiteliale sau frotiu;
• urină;
• spută;
• mucus și alte secreții biologice;
• biopatii ale membranei mucoase a tractului gastrointestinal.

Unde se utilizează diagnosticul PCR?

Posibilitățile de diagnosticare a bolilor infecțioase folosind reacția în lanț a polimerazei sunt mari, aceasta poate fi utilizată pentru a identifica o mare varietate de virusuri care provoacă infecții, cum ar fi:

Acest lucru nu este lista completa boli care sunt detectate cu ajutorul analizei PCR. Cele mai multe dintre aceste patologii sunt practic invizibile într-un stadiu incipient, dar consecințele impactului lor asupra organismului sunt extrem de negative și adesea periculoase pentru sănătatea și viața umană.

Femeilor însărcinate li se prescrie un test PCR pentru a detecta infecțiile cu transmitere sexuală, care cresc semnificativ riscul de cancer de col uterin și au un efect dăunător asupra cursului sarcinii și sănătății copilului. Prin urmare, diagnosticarea BTS este extrem de importantă pentru a preveni infectarea fătului cu microorganisme patogene.

Pe baza tuturor celor de mai sus, putem concluziona că diagnosticul de laborator folosind metoda PCR ajută medicul să stabilească un diagnostic precis și să prescrie o terapie eficientă în fiecare caz individual.

Acest lucru este interesant! Pe lângă medicină, metoda PCR este utilizată și în alte domenii, de exemplu, în criminalistică, atunci când este necesar să se identifice cine deține biomaterialul găsit la locul crimei, iar uneori PCR este folosit pentru a determina paternitatea, pentru a efectua experimente cu Mutația ADN-ului și alte experimente.

Avantajele și dezavantajele metodei

Avantajele diagnosticului PCR sunt:

• sensibilitatea ridicată a testului face posibilă identificarea chiar și a agenților unici ai agentului patogen, ceea ce face posibilă identificarea patologiei într-un stadiu incipient, în forme cronice și latente;
• versatilitatea metodei permite utilizarea aproape oricărui biomaterial pentru cercetare, de la saliva la celulele pielii;
• acoperire mare - la examinarea unei probe, este posibil să se determine prezența mai multor agenți patogeni diferiți;
• acuratețe - nivelul ridicat al acestei metode de examinare îi permite să nu dea indicatori falși;
• viteza - rezultatul este gata în medie în cinci ore, adică pacientul poate ridica concluzia a doua zi după depunerea biomaterialului;
• preț relativ scăzut - această metodă de diagnosticare nu diferă ca cost de alte analize de sânge de laborator;
• Prin această metodă se pot face diagnostice preclinice și retrospective. Primul identifică microorganismele patogene chiar înainte de debutul bolii, iar al doilea se efectuează după ce patologia a fost suferită, ceea ce vă permite să preveniți dezvoltarea patologiei și să o vindecați în timp, precum și să determinați forma latentă a bolii. boală care apare fără simptome evidente.

Dar nu există metode de diagnosticare perfecte, așa că PCR are și dezavantaje:

• cerințe ridicate pentru conformitatea cu procesul tehnologic;
• exigențe ridicate asupra profesionalismului tehnicienilor de laborator.

Sfat! Este mai bine să efectuați o astfel de analiză numai în cele mai bune și mai profesioniste laboratoare, unde au fost implementate sisteme stricte de control al calității.

Pentru a asigura fiabilitatea rezultatelor, este necesar să se respecte regulile de pregătire preliminară pentru analiză:

• atunci când donați saliva, nu trebuie să mâncați sau să beți medicamente cu patru ore înainte de testare înainte de procedură, trebuie să vă clătiți gura cu apă fiartă, apoi să efectuați un ușor masaj al pielii, astfel încât secreția să fie eliberată din glandă;
• Urina este de obicei colectată acasă. Înainte de aceasta, este necesar să spălați organele genitale și să colectați 50 ml din prima urină de dimineață într-un recipient special, nu este recomandabil să colectați material în timpul menstruației;
• Înainte de a dona spermă, un bărbat nu trebuie să aibă relații sexuale timp de trei zile, să nu meargă la saună, să nu facă o baie fierbinte și să nu ia băuturi alcoolice sau alimente picante. Imediat înainte de test, este interzis să urinați timp de trei ore;
• Pentru a face un frotiu urogenital, este recomandat să nu întreținem raporturi sexuale timp de trei zile. Cu două săptămâni înainte de test, este interzisă administrarea de medicamente antibacteriene. Timp de o săptămână, trebuie să încetați să utilizați geluri intime, unguente, supozitoare vaginale și dușuri. Cu trei ore înainte de a lua biomaterialul, trebuie să vă abțineți de la a merge la toaletă.
• Sângele este donat dimineața pe stomacul gol.

Materialul pentru diagnosticare trebuie colectat în condiții care să prevină contaminarea acestuia, deoarece acest lucru poate afecta în mod semnificativ veridicitatea rezultatului PCR.

transcrierea analizei

Testul poate arăta un rezultat pozitiv sau negativ. Negativ înseamnă că nu există infecții suspectate în organism și că persoana este sănătoasă. Pozitiv spune că pacientul este bolnav și are nevoie de tratament. Orice indicator trebuie să fie descifrat și exprimat de un medic. Nu ar trebui să vă supărați sau să vă temeți de rezultatele proaste;

Ți-a plăcut articolul nostru? Distribuie prietenilor pe rețelele sociale. rețele sau evaluați această postare:

Evaluare:

(Fără evaluări încă)

Sunt medic generalist, specialist generalist. Competența mea include diagnosticarea precoce a pacienților și tratamentul multor boli ale tractului gastro-intestinal, plămânilor și tractului respirator, ficatului, rinichilor, sistemului cardiovascular și genito-urinar, bolilor de piele, tulburărilor metabolice etc. 15 ani de experiență ca medic generalist în clinicile din Moscova , dintre care 5 am lucrat în același spital din Sankt Petersburg, voi fi bucuros să răspund la întrebările cititorilor blogului meu.

Diagnosticarea PCR (reacția în lanț a polimerazei) este una dintre cele mai moderne metode de examinare din domeniul biologiei moleculare și are unele avantaje față de alte metode.

Să aruncăm o privire mai atentă la analiza PCR - ce este?

Dintre toate testele de laborator, metoda PCR este considerată a fi una dintre cele mai precise pentru diagnostic diverse boli cauzate de viruși sau agenți bacterieni. În plus, diagnosticul PCR devine din ce în ce mai accesibil în fiecare zi și nivel crescut specificitatea garantează rezultate exacte și corecte, eliminând răspunsurile false.

Pe lângă amplificarea ADN-ului agentului patogen, această metodă de diagnosticare este utilizată pentru a determina paternitatea, clonarea genelor, pentru a identifica boli ereditare etc.

Ce boli pot fi diagnosticate folosind PCR?

Deci, ce este: analiza PCR și pentru ce este folosită această metodă? Un specialist poate prescrie PCR pentru a detecta diferite infecții în organism de origine bacteriană sau virală. De asemenea, folosind PCR, este posibilă detectarea infecțiilor care sunt cronice sau latente. Analiza PCR este eficientă chiar dacă există celule unice ale agentului patogen în organism.

Dacă PCR este prescrisă pentru a detecta infecțiile cu transmitere sexuală, obiectul poate fi chlamydia, trichomonas, candida, micoplasma, ureaplasma, agentul cauzator al papilomului și virusului gonoreei, gardnerella.

Înainte de a planifica o sarcină sau la apariția acesteia, viitorii părinți trebuie să se supună testelor de diagnosticare PCR pentru prezența bolilor infecțioase. La urma urmei, planificarea unei sarcini este o perioadă foarte importantă a vieții pentru viitoarea mamă și pentru bebeluș, așa că trebuie să tratați concepția în mod responsabil. Dacă, totuși, agenții infecțioși au fost identificați în corpul unei femei și al unui bărbat, este mai bine să amânați planificarea unei sarcini în timpul tratamentului.

Pe lângă infecțiile tractului genital, alți agenți patogeni pot fi detectați folosind PCR, cum ar fi:

• Prezența virusurilor B și C în organism: analiza PCR va ajuta la determinarea tipului de virus care este agentul cauzal al hepatitei chiar înainte de manifestările clinice ale bolii; metoda PCR va ajuta specialistul să selecteze tratamentul corect pentru boală și să monitorizeze eficacitatea acesteia;
• Prezența agenților patogeni de tuberculoză: această metodă de examinare poate identifica forme de tuberculoză pe care alții nu le pot detecta teste de laborator; PCR este prescrisă dacă o persoană are simptome corespunzătoare, de exemplu, temperatura corpului crește, în tractului respirator procesele inflamatorii încep, se observă o reacție pozitivă la efectuarea unui test de tuberculină;
• Virusul imunodeficienței umane;
• virusul Epstein-Barr și citomegalovirusul;
• Helicobacter.

Cum se efectuează analiza PCR?

Pentru a înțelege ce este analiza PCR, trebuie să știți cum se realizează acest studiu.

După preluarea materialului pentru cercetare, acesta este transferat într-un aparat special, unde sunt plasate enzime speciale care promovează formarea materialului genetic. După aceasta, ADN-ul și ARN-ul virusului începe să fie copiat până când crește până la o cantitate la care va fi posibil să se identifice agentul cauzal al bolii.

La femei, materialul este colectat cel mai adesea din canalul cervical și din uretră. În acest caz, pentru un rezultat corect, este foarte important să vă pregătiți pentru procedură. Pregătirea include următoarele:

• Cu 3 zile înainte de testul PCR, o femeie trebuie să se abțină de la actul sexual;
• Nu trebuie să urinați înainte de procedură;
• După sfârșitul menstruației, înainte de studiu ar trebui să treacă 4-5 zile.

Este de remarcat faptul că nu este necesară nicio pregătire specială pentru a extrage sânge.

Răspunde PCR

Transcrierea răspunsurilor este de obicei gata a doua zi. Există doar două rezultate: pozitiv (dacă există o infecție în organism) și negativ (dacă nu este detectat niciun ADN patogen).

Când răspundem la întrebarea ce este analiza PCR, putem spune cu siguranță că importanța acestei metode de cercetare de laborator este greu de supraestimat. Astfel de diagnostice vor putea monitoriza implementarea terapiei prescrise pentru viruși și infecții, separat în cazurile de hepatită și HIV.

Nu cu mult timp în urmă, a fost dezvoltată o metodă fiabilă, extrem de sensibilă și rapidă pentru diagnosticarea diferitelor boli infecțioase umane. Această metodă se numește „analiza PCR”. Ce este, care este esența sa, ce microorganisme poate identifica și cum să o luăm corect, vă vom spune în articolul nostru.

Istoria descoperirii

Metodele PCR sunt, de asemenea, utilizate în diagnosticul cancerului.

Avantajele metodei

Diagnosticarea PCR are o serie de avantaje:

1. Sensibilitate ridicată. Chiar dacă sunt prezente doar câteva molecule de ADN de microorganisme, analiza PCR determină prezența infecției. Metoda va ajuta cu bolile cronice și latente. Adesea, în astfel de cazuri, microorganismul nu este altfel cultivabil.
2. Orice material este potrivit pentru cercetare, de exemplu salivă, sânge, secreții genitale, păr, celule epiteliale. Cel mai frecvent este testul PCR de sânge și frotiu urogenital.

   

3. Nu este necesară cultivarea pe termen lung a culturilor. Procesul de diagnosticare automată vă permite să obțineți rezultate ale cercetării după 4-5 ore.
4. Metoda este aproape sută la sută fiabilă. Au fost înregistrate doar cazuri izolate de rezultate fals negative.
5. Capacitatea de a identifica mai multe tipuri de agenți patogeni dintr-o probă de material. Acest lucru nu numai că accelerează procesul de diagnosticare a bolii, dar și reduce semnificativ costurile materiale. Adesea, medicul prescrie analiză cuprinzătoare PCR. Costul unei examinări constând în identificarea a șase agenți patogeni este de aproximativ 1.500 de ruble.

Pentru ca rezultatele să fie de încredere atunci când efectuați un studiu PCR, trebuie să faceți testul urmând recomandările pentru pregătirea preliminară pentru diagnostic:

1. Înainte de a dona salivă, ar trebui să vă abțineți de la a mânca și de a lua medicamente cu 4 ore înainte de a colecta materialul. Imediat înainte de procedură, clătiți-vă gura cu apă fiartă.
2. Regulile de mai sus trebuie respectate și atunci când se prelevează o probă de pe suprafața interioară a obrazului. După clătire, se recomandă efectuarea unui masaj ușor al pielii pentru a elibera secreția glandei.
3. Urina este de obicei colectată acasă. Pentru a face acest lucru, trebuie să curățați temeinic organele genitale. 50-60 ml de urină trebuie colectate într-un recipient steril din plastic. Pentru a asigura puritatea materialului, se recomandă femeilor să introducă un tampon în vagin, iar bărbaților să tragă cât mai mult în spate pliul pielii. Nu puteți dona material în timpul menstruației.
4. Pentru a dona spermă, trebuie să vă abțineți de la actul sexual timp de 3 zile înainte de a colecta materialul. Medicii sfătuiesc, de asemenea, să evitați vizitarea saună și să faceți o baie fierbinte, să beți alcool și alimente picante. Ar trebui să vă abțineți de la urinat cu 3 ore înainte de test.
5. De exemplu, dacă se efectuează un test PCR pentru chlamydia, atât femeilor, cât și bărbaților li se recomandă să se odihnească sexual timp de 3 zile. Cu 2 săptămâni înainte de test nu trebuie să luați medicamente antibacteriene. Timp de o săptămână, trebuie să încetați să utilizați geluri intime, unguente, supozitoare vaginale și dușuri. Cu 3 ore înainte de test, trebuie să vă abțineți de la urinare. În timpul menstruației, materialul nu este colectat la numai 3 zile după oprirea sângerării, se poate face un frotiu urogenital.

PCR în timpul sarcinii

În așteptarea unui copil, multe boli infecțioase cu transmitere sexuală sunt extrem de periculoase pentru dezvoltarea normală a fătului. BTS pot provoca întârziere a creșterii intrauterine, avort spontan sau naștere prematură și defecte congenitale ale copilului. Prin urmare, este extrem de important să fiți supus testării PCR în primele etape ale sarcinii. Testul trebuie susținut la înregistrare - până la 12 săptămâni.



Materialul este colectat din canalul cervical folosind o perie specială. Procedura este nedureroasă și nu reprezintă un pericol pentru copil. De obicei, în timpul sarcinii, se efectuează o analiză pentru chlamydia folosind metoda PCR, precum și pentru ureaplasmoză, micoplasmoză, citomegalovirus, herpes și papilomavirus. Acest set de examinări se numește PCR-6.

PCR pentru diagnosticul HIV

Datorită faptului că metoda este foarte sensibilă la schimbările din organism și condițiile de diagnosticare, mulți factori pot afecta rezultatul. Prin urmare, analiza PCR pentru infecția cu HIV nu este o metodă de încredere; În restul de 2-4% din cazuri, testul dă rezultate fals pozitive.

Dar, în unele situații, nu te poți descurca fără diagnosticarea HIV prin PCR. Se efectuează de obicei persoanelor cu un rezultat ELISA fals negativ. Astfel de indicatori indică faptul că o persoană nu a dezvoltat încă anticorpi împotriva virusului și nu pot fi detectați fără o creștere multiplă a numărului. Este exact ceea ce se poate realiza prin efectuarea unui test de sânge folosind metoda PCR.

Un astfel de diagnostic este necesar și pentru copiii din primul an de viață născuți dintr-o mamă seropozitivă. Metoda este singura modalitate de a determina în mod fiabil statutul unui copil.

PCR pentru diagnosticarea hepatitei

Metoda reacției în lanț a polimerazei vă permite să detectați ADN-ul virusului hepatitei A, B, C cu mult înainte de formarea de anticorpi împotriva infecției sau apariția simptomelor bolii. Testul PCR pentru hepatita C este deosebit de eficient, deoarece în 85% din cazuri această boală este asimptomatică și fără tratament în timp util devine cronică.



Detectarea în timp util a agentului patogen va ajuta la evitarea complicațiilor și a tratamentului pe termen lung.

Examinare PCR cuprinzătoare

Analiza PCR complexă: examinare prin metoda reacției polimerice în lanț, care include determinarea simultană a mai multor tipuri de infecții: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, citomegalovirus, herpes tipurile 1 și 2, gonoree, papilomavirus. Prețul unei astfel de diagnostice variază de la 2000 la 3500 de ruble. in functie de clinica, materialele si echipamentele folosite, precum si tipul de analiza: calitativa sau cantitativa. Medicul va decide care este necesar în cazul dumneavoastră. În unele cazuri, este suficient să se determine prezența agentului patogen în altele, de exemplu, cu infecția cu HIV, un titru cantitativ joacă un rol important. La diagnosticarea tuturor agenților patogeni de mai sus, examinarea se numește „analiza PCR-12”.

Decodificarea rezultatelor analizei

Descifrarea analizei PCR nu este dificilă. Există doar 2 scale indicatoare - " rezultat pozitiv" și "rezultat negativ". Dacă este detectat un agent patogen, medicii pot confirma prezența bolii cu 99% de încredere și pot începe să trateze pacientul. Cu metoda cantitativă de determinare a infecției, indicatorul numeric al bacteriilor detectate va fi indicat în coloana corespunzătoare. Doar un medic poate determina amploarea bolii și poate prescrie tratamentul necesar.



În unele cazuri, de exemplu, la determinarea infecției cu HIV prin metoda PCR, dacă rezultatul este negativ, devine necesar să se efectueze examinări suplimentare pentru a confirma indicatorii obținuți.

Unde pot fi testat?

Unde să faci un test PCR: într-o clinică publică sau într-un laborator privat? Din păcate, în instituțiile medicale municipale, echipamentele și metodele sunt adesea depășite. Prin urmare, este mai bine să acordați preferință laboratoarelor private cu echipamente moderne și personal înalt calificat. În plus, într-o clinică privată vei obține rezultate mult mai rapid.

La Moscova, multe laboratoare private oferă teste PCR pentru diferite infecții. De exemplu, în astfel de clinici precum „Vita”, „Clinica complexă”, „ familie fericită", "Uro-Pro", efectuează analiza PCR. Prețul examenului este de la 200 de ruble. pentru identificarea unui agent patogen.

Se poate concluziona că diagnosticarea bolilor infecțioase folosind metoda PCR în cele mai multe cazuri este o modalitate rapidă și fiabilă de a detecta agentul patogen în organism în stadiile incipiente ale infecției. Dar totuși, în anumite cazuri, merită să alegeți alte metode de diagnosticare. Doar un specialist poate determina necesitatea unui astfel de studiu. Descifrarea analizei PCR necesită și o abordare profesională. Urmați recomandările medicului dumneavoastră și nu faceți singuri teste inutile.

Reacția în lanț a polimerazei (PCR) este o metodă de înaltă precizie în domeniul diagnosticării patologiilor ereditare, infecțiilor, bolilor virale în orice stadiu (acut sau cronic), precum și - într-un stadiu incipient - înainte de manifestările evidente ale bolii prin identificarea agenți patogeni pe baza lor ADN, ARN, care sunt material genetic, în probele obținute de la pacient. Și astăzi vom vorbi despre esența, etapele de diagnosticare și principiile metodelor de reacție în lanț a polimerazei (PCR), precum și despre costul acesteia.

Ce este reacția în lanț a polimerazei

Baza analizei este amplificarea (dublarea) - crearea multor copii dintr-o secțiune scurtă de ADN (acid dezoxiribonucleic), care reprezintă complexul genetic uman. Studiul necesită o cantitate foarte mică de substanță fiziologică (sputa, fecale, răzuire epitelială, suc de prostată, sânge, spermatozoizi, lichid amniotic, mucus, țesut placentar, urină, salivă, lichid pleural, lichid cefalorahidian).

În acest caz, de exemplu, chiar și un singur microbi dăunător poate fi detectat în tractul genito-urinar al pacientului.

Tehnica PCR (reacție în lanț a polimerazei) a fost dezvoltată de omul de știință american K. Mullis, care a primit Premiul Nobel în 1993.

• Folosit activ:
• în diagnosticul precoce al infecțiilor, genetice;
• la examenul medico-legal atunci când există o cantitate extrem de mică de ADN disponibilă pentru examinare;
• în medicină veterinară, farmaceutică, biologie, genetică moleculară;
• pentru identificarea unei persoane prin ADN, confirmarea paternității;

în paleontologie, antropologie, ecologie (la monitorizarea calității produselor, factorilor de mediu).

Acest videoclip vă va spune în detaliu ce este o reacție în lanț a polimerazei:

Reacția în lanț a polimerazei în diagnosticul bolilor infecțioase este una dintre cele mai fiabile metode de precizie și fiabilitate deosebite. De exemplu, fiabilitatea analizei PCR pentru chlamydia și mulți alți agenți patogeni este aproape de 100% (absolut). Cel mai adesea, procedura de reacție în lanț a polimerazei este prescrisă pacienților care au dificultăți în identificarea unui anumit agent patogen în timpul diagnosticului.

Se utilizează testul PCR de laborator:

• pentru a detecta agenți patogeni care provoacă infecții ale organelor urinare și genitale greu de identificat prin culturi sau metode imunologice;
• pentru rediagnosticarea HIV în stadiul inițial în cazul unui rezultat pozitiv, dar discutabil al testului inițial (de exemplu, la nou-născuți din părinți infectați cu SIDA);
• pentru a identifica cancerul într-un stadiu incipient (studiul mutațiilor oncogene) și corectarea individuală a regimului de tratament pentru un anumit pacient;
• în scopul depistarii precoce și al potențialului tratament al patologiilor ereditare.

Astfel, viitorii părinți fac un test pentru a afla dacă sunt purtători ai unei patologii genetice la copii, PCR determină probabilitatea de expunere la o boală transmisă prin moștenire;

• pentru a detecta patologiile fetale devreme gestație (celulele individuale ale embrionului în creștere sunt examinate pentru posibile mutații);
• la pacienții înainte de transplantul de organe - pentru „tiparea țesuturilor” (determinarea compatibilității tisulare);
• pentru a identifica organismele patogene periculoase din sângele donat;
• la nou-născuți - pentru a identifica infecțiile ascunse;
• pentru a evalua rezultatele tratamentului antiviral și antimicrobian.

De ce să fii supus unei astfel de proceduri?

Deoarece PCR este o metodă de diagnosticare extrem de eficientă, dând rezultate de aproape 100%, procedura este utilizată:

• pentru a confirma sau exclude diagnosticul final;
• evaluarea rapidă a eficacității terapiei.

În multe cazuri, PCR este singurul test posibil pentru detectare dezvoltarea bolii, dacă alte metode de diagnostic bacteriologic, imunologic și virusologic sunt inutile.

• Virușii sunt detectați folosind o procedură PCR imediat după infecție și înainte de apariția semnelor de boală. Detectarea precoce a virusului permite un tratament prompt.
• Așa-numita „încărcare virală” (sau numărul de viruși din organism) este de asemenea determinată prin analiza ADN-ului folosind o metodă cantitativă.
• Agenții patogeni specifici (de exemplu, bacilul tuberculozei Koch) sunt dificili și durează prea mult până la cultură. Analiza PCR permite detectarea rapidă a cantităților minime de agenți patogeni (vii și morți) în probe convenabile pentru testare.

Se utilizează analiza detaliată a ADN-ului patogen:

• pentru a determina sensibilitatea acestuia la anumite tipuri de antibiotice, ceea ce permite tratamentul imediat;
• să controleze răspândirea epidemilor în rândul animalelor domestice și sălbatice;
• pentru a identifica și urmări noi specii microbiene infecțioase și subtipuri de patogeni care au alimentat epidemiile anterioare.

Tipuri de diagnosticare

Metoda standard

Analiza reacției în lanț a polimerazei se efectuează pe baza amplificării multiple (dublării) unui fragment specific de ADN și ARN folosind enzime de primeri speciale. Ca rezultat al lanțului de copiere, se obține o cantitate suficientă de material pentru cercetare.

În timpul procedurii, doar fragmentul dorit (corespunzător condițiilor specifice specificate) este copiat și dacă este prezent efectiv în probă.

Iată cum funcționează PCR: video detaliat cu diagrame utile:

Alte metode

• PCR în timp real. În acest tip de cercetare, procesul de identificare a unui anumit fragment de ADN începe după fiecare ciclu, și nu după finalizarea întregului lanț de 30 - 40 de cicluri. Acest tip de cercetare vă permite să obțineți informații despre cantitatea de agent patogen (virus sau microb) din organism, adică să efectuați o analiză cantitativă.
• RT-PCR (mod transcripție inversă). Acest test este folosit pentru a căuta ARN monocatenar pentru a detecta virusurile a căror bază genetică este ARN (de exemplu, virusul hepatitei C, virusul imunodeficienței). În acest studiu, se folosește o enzimă specială - transcriptază inversă și un primer specific, iar ADN-ul monocatenar este construit pe baza ARN. Apoi a doua catenă de ADN este recuperată din această catenă și se efectuează procedura standard.

Indicații pentru testare

Procedura PCR este utilizată în clinica de boli infecțioase, neonatologie, obstetrică, pediatrie, urologie, ginecologie, venerologie, neurologie, nefrologie și oftalmologie.

Indicații pentru testare:

• determinarea riscului de a dezvolta anomalii genetice la un copil cu probabilitatea de patologii ereditare;
• diagnosticarea ambilor părinți atunci când planificați o sarcină sau starea gravă a mamei în timpul unei sarcini în curs;
• dificultăți de concepție, identificarea cauzelor infertilității;
• suspiciunea de infecții cu transmitere sexuală în stadiul acut și cu simptome ale trecerii lor la cronice;
• detectarea cauzelor proceselor inflamatorii de origine necunoscută;
• contacte sexuale ocazionale și regulate neprotejate;
• determinarea sensibilității unui microorganism patogen la antibiotice specifice;
• pacienții cu infecție latentă suspectată pentru a detecta agenți patogeni înainte de apariția simptomelor evidente (diagnostic preclinic);
• pacienții să confirme recuperarea după boală (diagnostic retrospectiv);

Diagnosticarea este, de asemenea, utilizată dacă este necesar să se identifice cu exactitate următorii agenți patogeni::

• virusuri hepatitice (A B C G), imunodeficiență umană, citomegalovirus;
• Vibrio cholerae;
• virus herpes simplex, specii herpetiforme;
• retro - adeno - și rinovirusuri;
• virusuri rubeolă, Epstein-Barr, varicelă (Zoster);
• parvo și picornovirusuri;
• bacteria Helicobacter pylori;
• Legionella, tipuri patogene de Escherichia coli;
• Staphylococcus aureus;
• patogen;
• clostridii, difterie și hemophilus influenzae;

De asemenea, este utilizat pentru a determina infecțiile:

• mononucleoza infecțioasă;
• borelioza, listerioza, encefalita transmisa de capuse;
• candidoză cauzată de ciuperci Candida;
• infecții cu transmitere sexuală – trichomoniază, ureaplasmoză, treponema pallidum, gardnereloză, gonoree, micoplasmoză, chlamydia;
• tuberculoză.

Contraindicatii pt

Deoarece procedura nu se desfășoară cu pacientul, fără niciun impact asupra organismului, ci cu material biologic luat pentru cercetare, nu există contraindicații pentru PCR din cauza absenței unui potențial pericol.

Cu toate acestea, biomaterialul nu este colectat din canalul cervical al uterului după procedura de colposcopie. Trimiterea frotiurilor și răzuirii pentru analiză este permisă numai la 4-6 zile după încheierea menstruației și încetarea completă a secreției.

Este metoda sigură?

Nu este posibil niciun impact negativ asupra pacientului în timpul unui studiu izolat al biomaterialului său în laborator.

Pregătirea pentru procedură (depunerea substanțelor biologice pentru analiză)

Orice fluid biologic, țesut sau secreții corporale servesc ca probă pentru analiza PCR, care detectează ADN-ul unui agent patogen străin. Substanța de testat este luată sub formă de prelevare de sânge dintr-o venă, răzuire din laringe, cavitate nazală, uretră, cavitate pleurală, col uterin.

Înainte de procedura de diagnostic, medicul explică pacientului ce material va fi colectat:

1. La examinarea infecțiilor cu transmitere sexuală, se colectează secreții din organele genitale, urină și un frotiu din uretra.
2. Când se analizează infecțiile herpetice, se prelevează citomegalovirus, mononucleoză, urină și un tampon de gât pentru analiză pentru hepatită, toxoplasmoză, se prelevează sânge dintr-o venă.
3. Pentru a diagnostica diferite tipuri, se recoltează lichidul cefalorahidian.
4. În pneumologie, probele pentru analiză sunt spută și lichid pleural.
5. Atunci când se efectuează un studiu al posibilelor infecții intrauterine în timpul sarcinii, lichidul amniotic și celulele placentare sunt utilizate pentru analiză.

Fiabilitatea și acuratețea analizei depind de sterilitatea condițiilor la luarea materialului. Deoarece testarea PCR este foarte sensibilă, orice contaminare a substanței de testat poate distorsiona rezultatul.

Pregătirea competentă pentru livrarea de biomaterial nu prezintă dificultăți pentru pacienți. Există anumite recomandări:

• când se analizează infecțiile cu transmitere sexuală:
  • excludeți contactele intime cu 72 de ore înainte de trimiterea materialului;
  • opriți utilizarea oricăror produse vaginale cu 3 zile înainte;
  • din seara zilei precedente nu efectuați igiena zonei examinate;
  • excludeți urinarea cu 3-4 ore înainte de a preleva o probă din uretră;
• încetați să luați antibiotice cu o lună înainte de testarea pentru infecții;
• sângele este donat dimineața înainte de a mânca și a bea;
• Prima probă de urină de dimineață este colectată într-un recipient steril după o toaletă intimă amănunțită.

Citiți mai jos despre modul în care se efectuează diagnosticarea folosind metoda reacției în lanț a polimerazei.

Cum funcționează procedura?

Când se efectuează un studiu PCR, anumite cicluri sunt repetate din nou și din nou într-un reactor (amplificator sau termociclor):

1. Primul pas este denaturarea. Saliva, sângele, materialul de biopsie, probele ginecologice, sputa, în care se suspectează prezența ADN-ului (sau ARN-ului) unui agent patogen, este plasată într-un amplificator, unde materialul este încălzit și ADN-ul este împărțit în două lanțuri separate.
2. Al doilea pas este recoacerea sau răcirea ușoară a materialuluiși adăugarea de primeri la acesta care pot recunoaște regiunile dorite din molecula de ADN și se pot lega de ele.
3. Al treilea pas este alungirea– apare după ce 2 primeri sunt atașați la fiecare dintre catenele de ADN. În timpul procesului, fragmentul de ADN al agentului patogen este completat și se formează copia acestuia.

Aceste cicluri se repetă ca o „reacție în lanț”, de fiecare dată ducând la dublarea copiilor unui anumit fragment de ADN (de exemplu, segmentul în care este programat un anumit virus). În câteva ore, se formează multe copii ale fragmentului de ADN, iar prezența lor în probă este detectată. După aceasta, rezultatele sunt analizate și comparate cu datele dintr-o bază de date cu diferite tipuri de agenți patogeni pentru a determina tipul de infecție.

Citiți mai jos despre decodificarea rezultatelor și concluzia bazată pe reacția PCR.

Decodificarea rezultatelor

Rezultatul final al studiului se emite la 1 – 2 zile de la depunerea materialului biologic. Adesea - deja în prima zi după analiză.

Analiza calitativă

• Negativ rezultatul înseamnă că nu au fost găsite urme de agenți infecțioși în substanța prezentată pentru testare.
• Pozitiv rezultatul înseamnă detectarea virusurilor sau bacteriilor patogene într-o probă biologică cu un grad foarte mare de acuratețe la momentul depunerii materialului.

Dacă rezultatul este pozitiv, dar nu sunt detectate semne de creștere a infecției, această stare a corpului se numește „transport sănătos” asimptomatică. Cel mai adesea observat la luarea biomaterialului dintr-un anumit loc (canal cervical, uretra, cavitatea bucală) în boli virale. În acest caz, tratamentul nu este necesar, dar este necesară supraveghere medicală constantă, deoarece există posibilitatea de:

• răspândirea virusului de la purtători și infectarea persoanelor sănătoase;
• activarea procesului și trecerea bolii la o formă cronică.

Totuși, dacă testul de sânge este pozitiv, acest lucru indică faptul că infecția a lovit corpul, iar aceasta nu mai este o stare de purtător, ci o patologie care necesită o terapie specifică imediată.

Analiza cantitativă

Rezultatul cantitativ este determinat de un specialist special pentru un anumit tip de infecție. Pe baza acestuia, este posibil să se evalueze gradul de dezvoltare și stadiul bolii, ceea ce face posibilă prescrierea promptă a tratamentului corect.

Cost mediu

Prețurile pentru reacția în lanț a polimerazei sunt determinate de: tipul cercetării, dificultatea identificării agentului patogen, dificultatea colectării materialului biologic, tipul analizei (calitative sau cantitative) și nivelul prețului în laborator.

Pe de altă parte, atunci când se studiază PCR, este posibil să se identifice mai mulți agenți patogeni simultan atunci când se colectează un tip de material pentru analiză. Acest lucru vă permite să economisiți la alte teste de laborator.

Costul aproximativ al analizei PCR în ruble:

• gonococ, gardnerella, trichomonas vaginalis – de la 180
• Chlamydia trachomatis – din 190
• papilomavirus - de la 380 la 500
• biocenoza tractului urogenital la femei (evaluarea cantitativă și calitativă a microflorei) – de la 800.

Și mai multe informații utile cu privire la testarea PCR sunt conținute în videoclipul de mai jos:

PCR este diagnosticul infecțiilor, o modalitate modernă și foarte precisă de a detecta diferite boli infecțioase. Cum diferă de alte analize?

Această abreviere înseamnă „reacția în lanț a polimerazei”. Potrivit Wikipedia, a fost inventat în 1983 de Kary Mullis, un om de știință american. A primit Premiul Nobel pentru descoperirea sa.

De ceva timp, PCR a fost folosit doar în scopuri științifice, după care a fost adoptat cu succes de medicină. Esența studiului este recunoașterea agentului infecțios la nivel de ADN și ARN. Fiecare agent patogen, introducându-se în ADN, își schimbă structura în funcție de un anumit tip. Prin tipul de ADN modificat devine clar pentru asistentul de laborator ce boală este ascunsă în corpul uman. Alte avantaje ale PCR includ:

1. Identificarea cauzei fundamentale a infecției care a lăsat „urme” în ADN. Atunci când mai multe boli sunt combinate, este dificil să identificăm pe cea care a început totul. Și pentru diagnostic și selecție corectă tratament eficient, reacția în lanț este de o importanță enormă;
2. PCR detectează nu numai ADN-ul modificat, ci și locul specific de transformare. Acest lucru este necesar pentru a elimina îndoielile cu privire la infecțiile false;
3. Diagnosticele PCR sunt atât de sensibile încât detectează chiar și bacterii și viruși singulari. Acestea pot rămâne în sânge după un tratament incorect prescris sau după întreruperea neplanificată a medicației. Cantitatea minimă de diagnosticare la descifrarea PCR este de 10 celule patogene. Alte metode de testare nu sunt la fel de eficiente;
4. Microorganismele patogene sunt detectate chiar și în absența simptomelor pronunțate ale unei BTS. Dacă o astfel de boală este detectată într-un stadiu incipient, tratamentul nu durează atât de mult ca formele sale avansate;
5. Pacientul primește destul de repede rezultatele PCR. Nu durează mai mult de 4-6 ore pentru a diagnostica infecțiile. Împreună cu decriptarea, întregul proces nu durează mai mult de 1-2 zile;
6. Materialul ADN luat o singură dată este suficient pentru a efectua 5-6 probe. Pacientul nu va trebui să fie supus frotiurilor de mai multe ori;
7. PCR și studiul infecțiilor nu stă pe loc, acest domeniu este în continuă evoluție. Sunt inventate noi sisteme de testare cu sensibilitate crescută, iar costul efectuării cercetării este redus. Dacă anterior era disponibil doar locuitorilor din mega-orașe, acum medicii de la clinicile de spitalizare din regiuni nu își pot imagina identificarea bolii fără ea.

Caracteristicile metodei PCR:

1. Acuratețe (erorile sunt minime și frecvența lor nu depășește 0,01%);
2. Sensibilitate (testul „calculează” bacterii individuale din sânge și frotiuri);
3. Specificitate (PCR detectează infecții care adesea nu se manifestă deloc până la un stadiu sever);
4. Unicitate (testele sunt eficiente în situațiile în care alte studii nu găsesc nimic).

Rezultatele analizei PCR

Cum funcționează metoda reacției în lanț, cum să vă pregătiți pentru analiză?

O reacție în lanț în laborator implică reproducerea repetată a diferitelor secțiuni de ADN și ARN pentru a găsi veriga foarte ruptă. Acizii sunt amplificați (dublați) folosind preparate enzimatice. Folosind enzime, tehnicianul de laborator obține un număr suficient de copii ale regiunii ADN-ului patogen pentru a compara PCR-ul acesteia cu mostre ale anumitor boli cauzate de infecție.

În mod obișnuit, sunt utilizate materiale biologice prelevate prin eșantionare sau tampon. Pentru identificare (descifrarea infecțiilor cu transmitere sexuală), se prelevează un frotiu din vagin, col uterin sau uretră pentru PCR. Uneori se folosește și urina.

Pentru a confirma sau infirma prezența hepatitei, toxoplasmozei sau HIV, se prelevează sânge dintr-o venă. Sângele luat de la un deget dă adesea rezultate fals negative. Mononucleoza este diagnosticată după colectarea materialului din faringe. Tuberculoza poate fi detectată după colectarea sputei, care este eliberată din abundență de la pacienți dimineața.

Un frotiu din vagin și col uterin pentru PCR este un test simplu de care nu ar trebui să vă fie frică. Cu 2-3 zile înainte, trebuie să renunți la activitatea sexuală. În același timp, este interzisă utilizarea gelurilor și săpunurilor pe bază de alcaline pentru igiena personală. Puteți spăla cu apă caldă obișnuită de la robinet. Ultima spălare este seara înainte de vizita de dimineață la laborator sau cabinetul medicului.

De asemenea, este recomandabil să opriți tratarea aftelor cu creme, unguente, supozitoare sau spray-uri, dacă se efectuează. Un frotiu este luat în primele zile după menstruație sau imediat după aceasta. Pentru a obține rezultate mai precise, se recomandă să nu vizitați toaleta timp de 2-3 ore înainte de a face un frotiu PCR.

La bărbați, se ia un tampon din uretră pentru o reacție în lanț. Materialul biologic este colectat folosind o sondă sterilă sau un tampon de bumbac introdus în uretră. În timpul procedurii, este posibil să aveți un ușor disconfort sau o senzație de arsură. De asemenea, bărbații vor trebui să renunțe temporar la sex și la produsele de igienă. Cu o săptămână înainte de analiză, tratamentul cu antibiotice și alte medicamente este oprit. Dacă disconfortul persistă după recoltare, se recomandă să contactați clinica cât mai curând posibil.

Să presupunem că studiul folosește sânge sau un tampon prelevat din organele genitale ale pacientului. Materialul genetic este plasat într-un dispozitiv amplificator PCR și acolo sunt adăugate enzime. ADN-ul este încălzit la 90-95°C până când lanțul este rupt în mai multe verigi. Acest proces se numește denaturare. În timpul funcționării reactorului, mii de copii ale acestuia potrivite pentru analiza (decodificarea reacției) a rezultatului sunt create dintr-o probă de ADN și ARN.

Rezultatele diagnosticului PCR

Reacția în lanț arată nu numai prezența infecției, ci și numărul exact de agenți patogeni prezenți. Dezvoltare ultimii ani- introducerea artificială a genelor de mutație în ADN-ul uman pentru a identifica o predispoziție la modificarea genotipului.

Ce dezvăluie diagnosticul PCR al infecțiilor?

O transcriere a rezultatelor testului este de obicei revizuită separat de medicul curant. Capacitățile de reacție în lanț vă permit să confirmați sau să infirmați prezența următoarelor boli:

După cum reiese clar din această listă, diagnosticul PCR oferă medicilor din multe specialități înalt specializate oportunități nelimitate. Metoda poate fi utilizată în pneumologie, virologie, infectiologie, oncologie, gastroenterologie, hematologie, ginecologie și urologie.

Decodificare PCR: rezultate

Testele de reacție în lanț sunt evaluate numai de medici în mod individual pentru fiecare pacient, ținând cont de patologiile existente și bolile cronice. Rezultatele analizelor PCR indică, după cum sa menționat mai sus, caracteristicile cantitative ale bacteriilor patogene. Consultându-i, medicul va stabili severitatea și stadiul bolii. Pe baza acestor indicatori, doza de medicamente și durata cursului de tratament sunt prescrise ulterior.

Un rezultat negativ al PCR înseamnă că nu există manifestări ale niciunui virus sau infecții în materialul biologic colectat. Un PCR pozitiv este un semnal de alarmă. Aceasta înseamnă că a fost detectată o infecție în sângele pacientului și în alte fluide biologice.

Dacă valorile sunt minime, aceasta poate indica purtarea simplă a bolii și nu doar dezvoltarea activă a bolii. Un simplu purtător de infecție, detectat doar prin PCR, dar care nu prezintă alte simptome, ar trebui monitorizat în mod constant de către un medic.

Este important să nu intrați în panică și să vă amintiți că majoritatea virușilor cunoscuți de știință pot fi tratați cu medicamente antibacteriene. Doar un specialist calificat cu experiență în tratarea unei anumite boli le poate selecta și înlocui unul cu altul dacă sunt ineficiente.

Decodificarea PCR poate fi efectuată nu numai la cererea unui medic, ci și la propria discreție. Este adesea făcut de femeile care planifică o sarcină în viitorul apropiat pentru a se asigura că nu există boli cu transmitere sexuală. Când se înregistrează la o consultație raională, o femeie însărcinată va trebui totuși să facă acest tip de diagnostic.

PCR este obligatorie pentru femeile care au avut mai multe avorturi sau avorturi spontane din diverse motive. Înainte de FIV, se efectuează o analiză pentru a elimina toate cauzele posibilei respingeri a ovulului fertilizat.

Bărbații tind să efectueze PCR după o vacanță în care au avut o dragoste de vacanță sau chiar mai multe. Diagnosticarea îi ajută să nu-și pună în pericol viața și sănătatea potențialilor parteneri sexuali.

Adesea, PCR devine singura șansă pentru un pacient de a scăpa de boală stadiu inițial când riscul de complicații și evoluție severă este neglijabil.